Sigma：分散酶®II

屬性：

質(zhì)量水平：100

表單：lyophilized solid

比活：≥0.5 units/mg solid

技術(shù)：

cell culture | mammalian: suitable
single cell analysis: suitable

溶解性：10 mM NaAc (pH 7.5) and 5 mM CaAc: soluble

儲(chǔ)存溫度：2-8°C

說(shuō)明：

應(yīng)用：

來(lái)自Sigma的該酶已被用于開發(fā)用于離體培養(yǎng)小鼠胚胎乳腺芽的實(shí)驗(yàn)方法。[1]它已被用于在從大鼠心臟分離線粒體的過程中對(duì)大鼠心臟碎片進(jìn)行處理。[2]它還被用于通過酶水解來(lái)分離牙髓干細(xì)胞（DPSC）。這些細(xì)胞已與通過外植體方法而分離的DPSC進(jìn)行了比較，以分析它們的干細(xì)胞和分化特性。[3]
中性蛋白酶® II已用于熒光激活細(xì)胞分選（FACS）。[4]它還被用于分離內(nèi)臟卵黃囊層。[5]
適用于制備測(cè)序用單細(xì)胞懸浮液。

生化/生理作用：

中性蛋白酶®II是一種中性的蛋白酶，可水解非極性氨基酸殘基的N-末端肽鍵。它可用于分離生長(zhǎng)在體外的多種組織和細(xì)胞。該酶非常溫和，不會(huì)對(duì)細(xì)胞膜造成損傷。它還可用于防止懸浮培養(yǎng)物中的細(xì)胞結(jié)塊。該蛋白酶可水解纖連蛋白和IV型膠原蛋白，但不能水解層粘連蛋白、V型膠原蛋白、血清白蛋白或轉(zhuǎn)鐵蛋白。[6]中性蛋白酶®II具有切割亮氨酸-苯丙氨酸鍵的特異性。Ca2+、Mg2+、Mn2+、Fe2+、Fe3+和Al3+ 可滅活分散酶I。EDTA、EGTA、Hg2+ 和其他重金屬可抑制該酶活性。[7]每g-mol純化分散酶I含有1g鋅原子。如果通過EDTA或EGTA等螯合劑除去鋅成分，則產(chǎn)生無(wú)活性的酶蛋白。該酶不受血清抑制。

外形：

含有乙酸鈣和乳糖的凍干粉

制備說(shuō)明：

可通過將粉末溶解在含有10 mM NaAc (pH 7.5)和5 mM CaAc的緩沖液中制備50 U/mL的儲(chǔ)備溶液。它應(yīng)當(dāng)被儲(chǔ)存在4 °C。

分析說(shuō)明：

該酶初始可以10 mg/ml溶解于50 mM Hepes/KOH pH 7.4, 150 mM NaCl中。 進(jìn)一步的稀釋應(yīng)當(dāng)在zui 適于待解離細(xì)胞的培養(yǎng)基中進(jìn)行。 中性蛋白酶是一種金屬蛋白酶，可通過包括Ca2+ , Mg2+, Mn2+以及Fe2+在內(nèi)的二價(jià)陽(yáng)離子激活。

其他說(shuō)明：

除特殊說(shuō)明，在pH 7.5，37 °C 條件下，一單位的酶每分鐘將會(huì)水解酪蛋白以產(chǎn)生與1.0 μ摩爾 (181 μg) 酪氨酸等同的顏色（Folin-Ciocalteu試劑提供的顏色）。

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